Cómo reconstituir un péptido liofilizado.
Reconstituir es disolver el polvo liofilizado en un volumen medido de disolvente para llevarlo a una concentración conocida. El objetivo es una solución homogénea sin degradar el péptido, y todo el control está en dos decisiones: qué disolvente y cuánto.
El disolvente
El disolvente habitual es agua bacteriostática, agua estéril con alcohol bencílico al 0.9%. El conservante permite varias extracciones del mismo vial sin comprometer la esterilidad relativa, algo que el agua estéril simple, de un solo uso, no ofrece.
Algunos péptidos poco solubles en agua requieren un disolvente distinto; la solubilidad de cada compuesto está en su ficha. Cuando el agua basta, es la opción más limpia.
Calcular el volumen
La concentración es la masa del vial dividida entre el volumen que añades. Un vial de 10 mg con 2 mL de disolvente queda a 5 mg/mL. Si partes de una concentración objetivo, el volumen es la masa entre esa concentración.
Para no hacer la cuenta a mano, la calculadora de concentración resuelve ambas direcciones y convierte a mg/mL, µg/mL y µg/µL.
La técnica
Deja que el disolvente escurra por la pared interna del vial, no directamente sobre el polvo. Evita agitar con fuerza: el peso molecular y los puentes disulfuro de muchos péptidos los hacen sensibles a la espuma y al estrés mecánico. Gira el vial con suavidad hasta disolver.
Si queda material sin disolver, espera unos minutos en frío antes de volver a girar. Una vez en solución, mantén el vial refrigerado y protégelo de la luz.
Preguntas frecuentes
¿Qué agua se usa para reconstituir?
Agua bacteriostática (agua estéril con alcohol bencílico al 0.9%), que permite varias extracciones del vial. El agua estéril simple es de un solo uso y no lleva conservante.
¿Por qué no se debe agitar con fuerza?
Porque la espuma y el estrés mecánico pueden desnaturalizar el péptido. Se gira el vial con suavidad y se deja escurrir el disolvente por la pared, no sobre el polvo.
¿Cuánta agua se añade?
La que fije tu concentración objetivo: volumen = masa ÷ concentración. Un vial de 10 mg a 5 mg/mL necesita 2 mL. Usa la calculadora para cualquier combinación.